RPS6Kb1重组蛋白
分类: 最上层  发布时间: 2018-03-20 18:39 

RPS6Kb1重组蛋白
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货号: HZ-RPS6Kb1
供应商: 沪震生物
数量: 20
英文名: Recombinant Ribosomal Protein S6 Kinase Beta 1 (RPS6Kb1)
保质期: 12个月
保存条件: 2-8°C不超过一个月,-80°C不超过12个月
规格:
  
产品名称RPS6KB1重组蛋白
英文名称:Recombinant Ribosomal Protein S6 Kinase Beta 1 (RPS6Kb1)
英文简称:PS6K; S6K; S6K1; STK14A; p70(S6K)-alpha; p70-S6K; p70-alpha; P70-S6 Kinase 1; 70 kDa ribosomal protein S6 kinase 1; Serine/threonine-protein kinase 14A
物种:(Human,人);(Mouse,小鼠); (Rat,大鼠)等其它种属。
来源:原核表达
宿主:E.coli
性状:冻干粉
规格:10µg/50µg/200µg/1mg/1g
储存:避免反复冻融。2-8°C不超过一个月,-80°C不超过12个月。
应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
如果需要有生物活性的蛋白,请参见活性蛋白。
重组蛋白质表达系统有以下三类,各有的特点:
原核表达系统 真核表达系统 无细胞表达系统
原核主要是大肠杆菌表达系统,方便,便宜,周期短,但有些蛋白会折叠不好,不带有糖基化等修饰。 真核包括酵母表达系统、杆状病毒-昆虫细胞表达系统、腺病毒表达系统等。一般能正确折叠,含有各种修饰。但价格高,周期长。 无细胞系统一般要靠公司来做,价格高。
真核系统和原核系统各自优缺点:
表达系统   系统优缺点 系统蛋白表达方式 优点 缺点
 
 
 
 
 
 
 
 
真核表达系统
 
 
 
 
哺乳动物细胞
 
表达的蛋白活性高,能够表达多复杂修饰 的蛋白;需要细胞房,无菌,成本投入高
 
瞬时转染
能够快速灵活的制备活性蛋白 蛋白表达量低,大量生产成本极高
 
 
稳定细胞系构建
筛选出的细胞株能够实验蛋白的大量生产 细胞株筛选困难且时间长,投入大
 
重组抗体表达
比普通单抗生产量有保证 需筛选细胞株,需耗时耗力
酵母表达系统 与哺乳动物相比只能表达简单修饰的蛋白 毕赤酵母表达 甲醇诱导操作方面 需要时间
酿酒酵母表达 不常用 不常用
昆虫表达系统 不常用
原核蛋白表达系统 大肠杆菌表达 操作简单。表达量高;
易形成包涵体,蛋白活性物保证
  枯草芽
孢杆菌表达
 
不常用
链霉菌 不常用
RPS6KB1重组蛋白是一种简单、高效的方法:通过优化目的基因的5'部分DNA序列,而且不需要通过软件预
测,完全随机,包含所有可能(理论上),且不改变氨基酸序列。
原理:蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关,因此mRNA的5'端必须得很好翻译,最好不要有复杂的二级结构;通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列,构建克隆,挑选多个克隆,诱导表达之,SDS-PAGE电泳检测表达量的高低,挑选高表达克隆进行测序。可参考文章来设计简并序列。
RPS6KB1重组蛋白实验步骤:
1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.引物合成上述简并序列,同时设计合成目的基因反向引物。
3.PCR扩展目的基因,这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列,同时不改变氨基酸序列。
4.双酶切,插入到目标载体。
5.转化。
6.挑选多个克隆(比如100-200个)到1.5ml EP管,直接诱导表达(记得带上为改造克隆菌株的对照)。
7.SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆,测序。
RPS6KB1重组蛋白分离纯化原则总结:
1.应尽可能利用蛋白质不同物理特性选择所用的分离纯化技术,而不是利用相同技术多次纯化;
2.不同的蛋白在性质上有很大区别,每一步纯化步骤都应当充分利用目的蛋白和杂质成分物理性质差异;
3.在纯化早期阶段要尽量减少处理体积,方便后续纯化;
4.在纯化后期阶段,再使用造价高的纯化方法,有利于纯化材料的重复使用,减少再生复杂性。
 
温馨提示:不可用于临床治疗。
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